نوع مقاله : مقاله پژوهشی
نویسندگان
1 کارشناسی ارشد بافتشناسی ـ جنینشناسی، گروه زیستشناسی سلولی ـ مولکولی، دانشکدة زیستشناسی، دانشگاه دامغان، دامغان، ایران
2 استادیار علوم تشریح، گروه زیستشناسی سلولی ـ مولکولی، دانشکدة زیستشناسی و پژوهشکدة علوم زیستی، دانشگاه دامغان، دامغان، ایران
چکیده
زمینه و هدف: عصاره برگ رزماری یک گیاه دارویی ، که تکثیر سلولهای بنیادی را تحریک می کند. لذا این مطالعه با هدف تعیین اثر عصاره رزماری بر تکثیرو بقاء سلول های بنیادی چربی انسانی (hASCs) صورت گرفت .
مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، بافت چربی از خانم های سزارینی بیمارستان دامغان، جدا شد. سلولهای استخراج شده در محیط کشت -MEMα Alpha-Dulbecco’s modified minimal essential medium حاوی 10% سرم جنین گاوی کشت داده شدند. بنیادی بودن سلولها، با روش فلوسایتومتری و بیان مارکرهای CD90, CD73, CD105, CD44, CD34, CD45 در تعداد 106 سلول و پتانسیل تمایزی آنها تأیید شد.
میزان بقاء و تکثیر سلولهای تیمار شده با غلظتهای µg/ml 30، 40، 50، 60 و 70 میکرو گرم بر میلی لیتر عصاره رزماری حاوی 40 درصد کارنوسیک اسید به مدت 24 و 48 ساعت با استفاده از تکنیکهای هموسایتومتری ، MTT و PCR ارزیابی شد.
MTT: [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide]
PCR: Polymerase chain reaction
داده ها با آنالیز واریانس یکطرفه(ANOVA)و آزمونTukey بررسی شد و سطح معنیداری 0.05 P≤ در نظر گرفته شد.
یافتهها : سلولهای hASCs کشت داده شده، در بررسی میکروسکوپی ظاهری دوکی شکل و فیبروبلاستی از خود نشان دادند و پاسخ مثبت به مارکرهاى CD44، CD73، CD90، CD105 و پاسخ منفی به مارکرهاى CD34 و CD45 دادند. همچنین قابلیت تمایز به سلول های چربی و استخوانی در آنها اثبات شد. سرعت تکثیر و میزان بقاء سلولهای تیمار شده با رزماری در غلظت µg/m50 و به مدت 48 ساعت افزایش معنی داری 0.05 P≤را در مقایسه با سلول هایی که در محیط فاقد رزماری وحاوی سرم کشت داده شده بودند، نشان داد.
نتیجه گیری: عصاره رزماری به عنوان مکمل سرم میتواند سرعت تکثیر و بقاء hASCs را افزایش دهد و بدین ترتیب سلولهای مناسب تری برای پیوند خواهند بود.
کلیدواژهها
موضوعات
عنوان مقاله [English]
Rosemary Extract, a serum supplement and inducer of human adipose stem cells proliferation in vitro
نویسندگان [English]
- Maryam Izadi Tol Sorkhi 1
- Maryam Haji Ghasem Kashani 2
- Mohammad Taghi Ghorbanian 2
1 MSc, Department of Cellular & Molecular Biology, Faculty of Biology, University of Damghan, Damghan, Iran
2 Associate Professor, Department of Cellular & Molecular Biology, Faculty of Biology Institute of Biological Sciences, University of Damghan, Damghan, Iran
چکیده [English]
Background: Rosemary leaf extract, as a medicinal plant, can stimulate stem cells proliferation. The aim of this study was to determine the effect of rosemary extract on the proliferation and survival of human adipose stem cells (hASCs).
Materials and Methods: In this experimental study, fat tissue was isolated from Caesarean women at Damgan Hospital. Extracted cells were cultured in α–MEM (Alpha-Dulbecco’s modified minimal essential medium) containing 10% FBS. Stemness of cells was confirmed by flow cytometry and expression of CD44, CD105, CD73, CD90, CD34, CD45 markers of 106 cells and their differentiation potential. The survival rate, proliferation of cells treated with 30, 40, 50, 60 and 70 µg/ml concentrations of Rosemary extract containing 40% of carnosic acid for 24 and 48h were evaluated using hoemocytometry, MTT and PCR assays.
MTT: [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide]
PCR: Polymerase chain reaction.
The data were analyzed using Spss software (version 16), with Tukey test and the level of significance was considered 0.05.
Results: Cultured hASCs showed spindle and fibroblastic shapes under microscopic study. They expressed positive response to CD44, CD73, CD90, CD105 and negative response to CD34 and CD45markers and differentiated into adipocytes and osteocytes. The proliferation rate and survival of cells treated with Rosemary at a concentration of 50 μg/ml for 48 h were increased significantly (P≤0.05), as compared to cultured cells in medium without Rosemary, containing serum.
Conclusion: Rosemary extract as a supplement to the serum can increase the rate of proliferation and survival of hASCs, making the cells more suitable for transplantation.
کلیدواژهها [English]
- Adipose stem cell
- Rosemary
- proliferation
)