بهینه‌سازی شرایط رشد هیبریدهای مولد آنتی‌بادی مونوکلنال علیه آنتی‌ژن لیشمانیا اینفنتوم

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسنده

استاد استادیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم، دانشگاه محقق اردبیلی، اردبیل، ایران

چکیده

زمینه و هدف: لیشمانیا اینفانتوم، عامل اتیولوژیک لیشمانیوز احشایی در ایران است. واکسن‌های مؤثر و روش‌های تشخیصی برای کنترل لیشمانیوز لازم است. آنتی‌بادی‌های مونوکلونال ابزاری باارزش برای تشخیص، درمان و تعیین ویژگی آنتی‌ژنی انگل‌ها مورد استفاده قرار گرفته‌اند. هدف از این مطالعه، بهینه‌سازی شرایط رشد هیبریدهای مولد آنتی‌بادی مونوکلنال علیه آنتی‌ژن پروماستیگوت  لیشمانیا اینفنتوم است.
مواد و روش‌ها: موش‌ها توسط آنتی‌ژن لیشمانیا اینفنتوم واکسینه شدند و تیتر آنتی‌بادی‌های آنان توسط روش الایزا تعیین شدند. سلول‌های طحال موش‌هایی که به‌خوبی توسط آنتی‌ژن لیشمانیا اینفنتوم ایمن شده بودند با سلول‌های SP2/0 در حضور پلی‌اتیلن گلیکول ادغام شدند. تأثیر سوپرناتانت سلول‌های SP2/0 و سلول‌های ماکروفاژ صفاقی موش‌ها بر تکثیر سلول‌های هیبریدوما بررسی شدند.
یافته‌ها: در میان 12 فیوژن درمجموع 26 مونوکلون مثبت بودند که 12 مونوکلون جذب نوری (OD) قابل‌قبولی داشتند. 4 کلون به‌عنوان D2 FVI6  8، 8D2 FVI3 ،   6G2 FV4 و 6G2 FV3  تعیین شدند. از این هیبریدها، مونوکلونال آنتی‌بادی‌ها علیه لیشمانیا اینفانتوم به‌دست آمد. همچنین این مطالعه نشان داد که مایع رویی (سلول‌هایSP2/0 و سلول‌های ماکروفاژ صفاقی) نقش کلیدی در تکثیر هیبریدوما و تولید آنتی‌بادی‌های مونوکلونال دارد که سرشار از فاکتورهای رشد است.
نتیجه‌گیری: به نظر می‌رسد در آینده نزدیک مایع رویی مذکور می‌تواند به‌عنوان یک فاکتور رشد برای سلول‌های سرطانی و غیرسرطانی در مراکز تحقیقاتی در سطح وسیع‌تری مورد استفاده قرار گیرد.

کلیدواژه‌ها

موضوعات


عنوان مقاله [English]

Monoclonal Antibody Against Antigens of Leishmania infantum: Optimize the Growth Condition of Monoclonal Antibody-producing Hybrids

نویسنده [English]

  • Ezzat Nourizadeh
Assistant Professor, Department of Microbiology, College of Science, University of Mohaghegh Ardabili, Ardabil, Iran
چکیده [English]

Introduction: Leishmania (L.) infantum is the etiologic cause of visceral leishmaniasis in Iran. Efficient vaccines and diagnosis methods are required to control leishmaniasis. The aim of this study is produce and optimize monoclonal antibodies against promastigotes forms of L. infantum antigen.
Materials and Methods: The mice were vaccinated with the L. infantum antigen and their antibody titers were determined by the ELISA method. Spleen cells of the most immune mouse were fused with SP2/0 in the presence of Poly Ethylene Glycol.The effect of supernatant of SP2/0 and mice peritoneum macrophage cells culture (SSMCC) on hybridoma cell proliferation was studied.
Results: Among the 12 fusion, a total of 26 monoclonal were positive.12 of which had acceptable optical absorbance in OD 450 nm. Finally, 4 clones, designated as 8D2 FVI6, 8D2 FVI3, 6G2 FV4 and 6G2 FV3. From these hybrids, anti-promastigotes L. infantum monoclonal antibodies were obtained. SSMCC was shown to play a key role in hybridoma proliferation and of mAb production. It seemed that SSMCC is rich of growth factors.
Conclusion: It seems in the near future, this SCCSM can be used as a growth factor for cancerous and non-cancerous cells in research centers at a wider level.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Monoclonal Antibodies
  • Leishmania Infantum
  • cell culture
  1. Assefa Leishmaniasis in  Ethiopia: A  systematic  review  and  meta-analysis  of prevalence in animals and humans. Heliyon. 2018; 4(8):723-731.
  2. Abrham A , Zewdu S. A Review on Canine Leishmaniasis; Etiology, Clinical Sign, Global Veterinaria.2016; 17 (4): 343-352.
  3. Raul R R , et al. Canine Leishmaniasis: An Overview of the Current Status and Strategies for Control. BioMed Research International.2018; 2018: 26:1-12.
  4. Oryan,A., Akbari M.Worldwide risk factors in leishmaniasis. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016; 9(10): 925–932.
  5. Andréia P T, Tayse D. S, Tatiane A P, Renato L S. Sexual and vertical transmission  of  visceral    The  Journal  of  Infection  in Developing Countries.2014; 8(4):403-7.
  6. Gashaw E, Debalke D,  Aman E,  Emim B.  Review  on Leishmaniasis. Journal of American Science. 2018;142: 67-73.
  7. Iatta R, Furlanello T, Colella V, Tarallo V, Latrofa M, Brianti E, et al. A nationwide survey of Leishmania infantum infection in cats and associated risk factors in Italy. PLoS Negl Trop Dis.  2019; 13: e0007594.
  8. Cantos-Barreda A, Navarro R, Pardo-Marín L, Martínez-Subiela S, Ortega E, Cerón JJ, et al. Clinical leishmaniosis in a captive Eurasian otter (Lutra lutra) in Spain: a case report. BMC Vet Res.2020; 16:312.
  9. Dong, S.; Zhang, C.; Liu, Y.; Zhang, X.; Xie, Y.; Zhong, J.; Xu, C.; Liu, X. Simultaneous production of monoclonal antibodies against Bacillus thuringiensis (Bt) Cry1 toxins using a mixture immunization. Anal. Biochem. 2017; 531, 60–66.
  10. Gao, Y.; Huang, X.; Zhu, Y.; Lv, Z. A brief review of monoclonal antibody technology and its representative applications in immunoassays. J. Immunoass. Immunochem. 2018; 39, 351–364.
  11. Pan AA, McMahon-Pratt D. Monoclonal antibodies specific for the amastigote stage of Leishmania I. Characterization of antigens associated with stage- and species-specific determinants.J Immunol. 1988; 140(7):2406-14.
  12. Froes AM, Santos CVD, Penha-Filho ML, Teixeira MCA et al. Sub-clinical infection as an effective protocol for obtaining anti-Leishmania chagasi amastigote antibodies of different animal species. Veterinary Immunology and mmunopathology. 2004; 99: 135–141.
  13. He, K.; Mao, Q.; Zang, X.; Zhang, Y.; Li, H.; Zhang, D. Production of a broad-specificity monoclonal antibody and application as a receptor to detection amatoxins in mushroom. Biologicals. 2017; 49, 57–61.
  14. Jose´ F. Santos-Neto , Fabricia O.Technological Advancements in Monoclonal Antibodies. Hindawi. 2021;2021:1-19.
  15. Listek M, Hönow A, Gossen M, Hanack K. A novel selection strategy for antibody producing hybridoma cells based on a new transgenic fusion cell line . Sci. Rep. 2020;10 (1): 1664.
  16. Mendoza-Roldan, J.A.; Otranto, D.; Zatelli, A. Clinical, haematological and biochemical findings in tigers infected by Leishmania infantum. BMC Vet. Res. 2020;16: 214.
  17. Azami-Conesa, I.; Martínez-Díaz, R.A.; González, F.; Gómez-Muñoz, M.T. First Detection of Leishmania infantum in Common Urban Bats Pipistrellus pipistrellus in Europe. Res. Vet. Sci. 2020; 132: 172–176.
  18. Kuppeveld, B.L. Haagmans, F. Grosveld, B.J. Bosch. A human monoclonal antibody blocking SARS-CoV-2 infection. Nat. Commun. 2020;11 (1): 2251.
  19. Tang H, Guo Z, Zhang M, Wang J, Chen G, Cao X. Endothelial stroma programs hematopoietic stem cells to differentiate into regulatory dendritic cells through IL-10. Blood 2006; 108(4):1189-97.
  20. Zaroff S, Tan G. Hybridoma technology: the preferred method for monoclonal antibody generation for in vivo applications. Biotechniques.2019; 67 (3) : 90-92.
  21. De Almeida R, Nakamura CN, De Lima Fontes M et al. Enhanced immunization techniques to obtain highly specific monoclonal antibodies. MAbs.2018; 10(1): 46–54. 
  22. Watabe I , Kuwabara T. “Biosimilarity assessment of biosimilar therapeutic monoclonal antibodies,” Drug Metabolism and Pharmacokinetics.2019;34 (1): 64–70.
  23. Grilo AL, Mantalaris A. The increasingly human and profitable monoclonal antibody market. Trends Biotechnol. 2019;37(1): 9–16 .