بیوتکنولوژی و نانوتکنولوژی
امیرحسین برقی؛ حسین هنری؛ محمدعلی ابراهیمی؛ غلامرضا بخشی خانیکی؛ سید مجتبی آقایی
دوره 27، شماره 1 ، فروردین و اردیبهشت 1399، ، صفحه 103-112
چکیده
: غاسول صابونی دارای ایزوفرم های مختلف پروتئین ساپورین می باشد. ساپورین جزء پروتئین های غیر فعال کننده ریبوزومی (RIPs) است. ایزوفرم SO9 ساپورین ها، آدنین 4324 موجود در توالی حفاظت شده GAGA را دپورینه کرده و باعث اختلال در پروتئین سازی می‌گردد. در این مطالعه بیان ایزوفرم SO9 در باکتری E. coli و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش سوری انجام شد. روش بررسی: ...
بیشتر
: غاسول صابونی دارای ایزوفرم های مختلف پروتئین ساپورین می باشد. ساپورین جزء پروتئین های غیر فعال کننده ریبوزومی (RIPs) است. ایزوفرم SO9 ساپورین ها، آدنین 4324 موجود در توالی حفاظت شده GAGA را دپورینه کرده و باعث اختلال در پروتئین سازی می‌گردد. در این مطالعه بیان ایزوفرم SO9 در باکتری E. coli و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش سوری انجام شد. روش بررسی: ژن SO9 سنتز شده، از پلاسمید pUC57-SO9 نوترکیب توسط آنزیم های محدود کننده BamH1 و Sal1 جدا و در وکتور بیانی pET28a(+) زیر همسانه سازی شد. بیان پروتئین نوترکیب با IPTG القا گردید. پروتئین SO9 نوترکیب به وسیله کروماتوگرافی تمایلی نیکل خالص سازی شد. برای تایید پروتئین نوترکیب از تکنیک Western blotting استفاده شد. واکسیناسیون موش های سوری با پروتئین تخلیص شده به صورت صفاقی انجام و تیتر IgG سرم به وسیله ELISA بررسی شد.نتایج: زیر همسانه سازی ژن SO9 در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله واکنش PCR و هضم آنزیمی تایید شد. حضور باند پروتئینی 29 کیلودالتون در SDS-PAGE، بیان بالای پروتئین نوترکیب را نشان داد. پروتئین نوترکیب SO9 به وسیله آنتی بادی پلی کلونال شناسایی شد. بعد از تزریق پروتئین در گروه های تست نسبت به گروه های کنترل، میزان تیتر آنتی بادی تولید شده به وسیله تست ELISA اندازه گیری شد.نتیجه گیری: خاصیت ادجوانتی و ایمنوژنی آنتی ژن SO9 نوترکیب تخلیص شده سبب میشود که از این آنتی بادی برای شناسایی میزان حضور SO9 در گیاه غاسول صابونی، به عنوان کاندید واکسن، تهیه کیت تشخیصی و در مطالعات ضد سرطانی سلول های انسانی استفاده گردد.
سید مسیح اعتماد ایوبی؛ حسین هنری
دوره 23، شماره 1 ، فروردین و اردیبهشت 1395، ، صفحه 95-102
چکیده
زمینه و هدف: سیاهزخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل این بیماری باکتری باسیلوس آنتراسیس میباشد. آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس برای درمان و واکسن قابل استفاده می باشد. هدف این مطالعه بیان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس در باکتریE. coli میباشد. مواد و روش ها: قطعات ژنی مورد نظر از پلاسمید ...
بیشتر
زمینه و هدف: سیاهزخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل این بیماری باکتری باسیلوس آنتراسیس میباشد. آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس برای درمان و واکسن قابل استفاده می باشد. هدف این مطالعه بیان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس در باکتریE. coli میباشد. مواد و روش ها: قطعات ژنی مورد نظر از پلاسمید pXOI تکثیر و با عمل SOEiong PCR قطعه بدست آمده در کلونینگ وکتور همسانهسازی گردید و بعد از جداسازی به وکتور pET28a(+) زیرهمسانهسازی و به باکتری E.coli سویه BL21(DE3) تراریخت شد. بیان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس تحت القایIPTG انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتیژن حاصل در چهار نوبت به موشهای سوری تزریق شد. آنتیبادی پلیکلونال تولید شده در سرم موشها اندازهگیری گردید. یافته ها: آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس کلون شده در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیلهی PCR، آنالیز آنزیمی و توالی یابی تأیید گردید. پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکهگذاری وسترن تایید شد. سرم از خون موش جداسازی شد و تیتر آنتی بادی علیه PA تغییر یافته از طریق الایزای غیر مستقیم ارزیابی گردید. نتیجه گیری: پروتئین تولیدی دارای خاصیت مهار کنندگی بالایی برای فاکتورهای بیماریزای LF و EF می باشد. با توجه به شناسایی آنتی ژن PA بوسیله آنتی بادی آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس، میتوان بهصورت مجزا، یا ترکیبی با سایر دومن های PA در طراحی واکسن و بعنوان دارو برای درمان و پیشگیری بیماری سیاهزخم استفاده نمود.
محمد ابراهیم مینایی؛ مجتبی سعادتی؛ مصطفی نجفی؛ حسین هنری
دوره 22، شماره 5 ، آذر و دی 1394، ، صفحه 797-804
چکیده
زمینه و هدف: نانوبیوسنسورها می‌توانند بهجای روش‌های تشخیص قدیمی باکتری اشریشیاکولی O157:H7 مورد استفاده قرارگیرند. در این تحقیق، یک نانوبیوسنسور برای تشخیص بخشی از ژن rfbE باکتری اشریشیا کولی O157:H7توسط تثبیت و هیبریداسیون توالی تک رشته DNAssDNA)) در سطح الکترود اصلاح شده با نانو ذرات طلا مورد بررسی قرارگرفته است.
موادّ و روشها: روش طیف ...
بیشتر
زمینه و هدف: نانوبیوسنسورها می‌توانند بهجای روش‌های تشخیص قدیمی باکتری اشریشیاکولی O157:H7 مورد استفاده قرارگیرند. در این تحقیق، یک نانوبیوسنسور برای تشخیص بخشی از ژن rfbE باکتری اشریشیا کولی O157:H7توسط تثبیت و هیبریداسیون توالی تک رشته DNAssDNA)) در سطح الکترود اصلاح شده با نانو ذرات طلا مورد بررسی قرارگرفته است.
موادّ و روشها: روش طیف بینی امپدانس الکتروشیمیایی برای بررسی خواص حسگری الکترود اصلاح شده مورد استفاده قرارگرفته است. سطح الکترود کار با روش الکتروشیمیایی توسط نانوذرات طلا اصلاح شد. توالی تک رشتهی DNA تیوله با روش تک لایهی خود تجمعی، روی سطح الکترود طلا بهمدت دو ساعت تثبیت شد. تک لایهی مخلوط، شامل مرکاپتوهگزانول و مرکاپتوپروپیونیک اسید بهعنوان یک لایهی مسدودکننده استفاده گردید. هیبریداسیون DNA/DNA با غوطه‌ورسازی الکترود طلای اصلاح شده با ssDNA در غلظت 1 میکرومولار DNA هدف انجام شد.
یافته‌ها: نتایج نشان داد که الکترود اصلاح شده با نانوذرات طلا پس از تثبیت ssDNA، بهطور مؤثری ژن rfbE باکتری اشریشیا کولی O157:H7 را ازطریق هیبریداسیون DNA تشخیص می‌دهد. نانوبیوسنسور گزینشپذیری بسیار خوبی در تشخیص توالی DNA هدف نسبت به توالی دارای باز ناجور و توالی غیر مکمل نشان داد.
نتیجهگیری: با توجه به نتایج بهدست آمده و بررسی مطالعات مشابه، نانوبیوسنسور الکتروشیمیایی مبتنی بر هیبریداسیون DNA، دارای مزایایی ازجمله هزینهی کم، سادگی و کوچک سازی میباشد و می‌تواند زمینه‌ای برای توسعهی ابزار تشخیص ژنومی را فراهم آورد.
حسین هنری؛ مهدی باران وند؛ محمدابراهیم مینایی
دوره 21، شماره 6 ، آذر و دی 1393، ، صفحه 1103-1112
چکیده
زمینه و هدف: شیگلوز عفونت حادّ روده‌ای حاصل از شیگاتوکسین و توکسین‌های شبه شیگاست که توسط باکتری شیگلا و باکتری اشرشیا کلی انتروهموراژیک (EHEC) و اشرشیا انتروتوکسینوژنیک (ETEC) ایجادمی‌شود. این بیماری، میزان شیوع بالایی در جهان دارد و بهعنوان یک عامل بیوتروریستی شناخته میشود. هدف از این مطالعه بررسی ایمنی‌زایی پروتئین نوترکیب ...
بیشتر
زمینه و هدف: شیگلوز عفونت حادّ روده‌ای حاصل از شیگاتوکسین و توکسین‌های شبه شیگاست که توسط باکتری شیگلا و باکتری اشرشیا کلی انتروهموراژیک (EHEC) و اشرشیا انتروتوکسینوژنیک (ETEC) ایجادمی‌شود. این بیماری، میزان شیوع بالایی در جهان دارد و بهعنوان یک عامل بیوتروریستی شناخته میشود. هدف از این مطالعه بررسی ایمنی‌زایی پروتئین نوترکیب STxB و نانوالیاف حاوی پروتئین STxB به صورت تجویز نازالی و تزریقی میباشد.
مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، وکتور pET28a(+) دارای ژن stxB در اختیار قرارگرفت، این وکتور به درون باکتری DE3 E. Coli BL21 ترانسفورم شد. این باکتری روی محیط آنتی بیوتیک رشد داده شد و با روش PCR مستقیم، بیان پروتئین و ژل SDS-PAGE مورد تایید قرارگرفت. پروتئین نوترکیب توسط ستون نیکل تخلیص و توسط ژل SDS-PAGE و ایمنوبلاتینگ نیز تاییدشد. نانوالیاف کایتوسان حاوی پروتئین STxB توسط دستگاه الکتروریسی سنتز شد. تجویز نازالی و تزریقی پروتئین STxB و نانوالیاف حاوی پروتئین STxB در چهار نوبت متوالی به موشهای سوری انجام و تیترآنتی بادی آنها بررسی شد.
یافته‌ها: با انجام آزمایش الایزا، افزایش تیتر آنتی بادی IgG علیه پروتئین STxB، درحالت تزریقی و نازالی مشاهده و درحالت نازالی برای نانوالیاف حاوی پروتئین STxB مشاهده نشد که ممکن است به علت عدم جذب آنتی ژن توسط سلول‌های اپیتلیالی بینی موش باشد. موشهای ایمن شده توانستند تا پنج برابر LD50 شیگا توکسین E. coli O157:H7 را تحمل نمایند.
نتیجه گیری: نتایج بدست آمده از این تحقیق بیانگر آن است که با تجویز نازالی و تزریقی پروتئین STxB موشهای ایمن شده می‌توانند شیگا توکسین E. coli O157:H7 را تحمل نمایند.